Quin és l'objectiu d'utilitzar ddNTP?
Quin és l'objectiu d'utilitzar ddNTP?

Vídeo: Quin és l'objectiu d'utilitzar ddNTP?

Vídeo: Quin és l'objectiu d'utilitzar ddNTP?
Vídeo: Секвенирование по Сэнгеру 2024, De novembre
Anonim

DdNTP es refereix a Didesoxinucleòtids trifosfats que s'utilitzen en el mètode didesoxi de Sanger per produir diferents longituds de cadenes d'ADN per a la seqüenciació d'ADN. Això provoca la finalització del procés de polimerització de l'ADN (o allargament de l'ADN) perquè aquest procés necessita un grup 3'-OH per continuar.

Per això, per què s'utilitzen els ddNTP en la seqüenciació?

Didesoxinucleòtids són inhibidors que allargan la cadena de l'ADN polimerasa, utilitzat en el mètode Sanger per a l'ADN seqüenciació . Els didesoxirribonucleòtids no tenen un grup hidroxil 3', per tant, no es pot produir cap allargament de la cadena una vegada que aquest didesoxinucleòtid està a la cadena. Això pot provocar la terminació de l'ADN seqüència.

De la mateixa manera, els ddNTP s'uneixen als dNTP? Un o més dels dNTPs estan marcats radioactivament per ajudar a visualitzar els productes de replicació. Finalment, cada tub rep un dels quatre nucleòtids especials anomenats didesoxinucleòtids ( ddNTPs ). Tanmateix, un cop incorporada, l'ADN polimerasa no pot estendre més la cadena perquè necessita un 3'-OH adjuntar al següent nucleòtid.

De la mateixa manera, es pot preguntar, com els ddNTP detenen una reacció de seqüenciació?

Quan està present en petites quantitats seqüenciació de reaccions , trifosfats de didesoxiribonucleòsids ( ddNTPs ) finalitzar el reacció de seqüenciació en diferents posicions de les cadenes d'ADN en creixement. Els ddNTP aturan una reacció de seqüenciació perquè: fan que l'ADN polimerasa caigui de la cadena de plantilla. c.

Quina tècnica es podria utilitzar amb didesoxinucleòtids?

La seqüenciació de Sanger és a mètode de la seqüenciació de l'ADN basat en la incorporació selectiva de terminadors de cadena didesoxinucleòtids per ADN polimerasa durant la replicació de l'ADN in vitro. Desenvolupat per Frederick Sanger i col·legues el 1977, va ser el més àmpliament utilitzat seqüenciació mètode durant aproximadament 40 anys.

Recomanat: