Taula de continguts:

Com trieu els clons?
Com trieu els clons?

Vídeo: Com trieu els clons?

Vídeo: Com trieu els clons?
Vídeo: ЭЙРДРОП ATHENA ДЛЯ ХОЛДЕРОВ ELYSIAN ELS 2024, De novembre
Anonim

Quan escollint a clonar , assegureu-vos que les arrels siguin fortes, blanques i que sobresurtin amb ganes del medi de cultiu. Si les arrels són marrons i arrugades, o si semblen inactives, torneu-les a posar i busqueu-ne una de millor.

A més, com es clona una sola cèl·lula?

  1. Compteu les cèl·lules per posar ~ 16.000 cèl·lules al primer pou (A1) d'una placa de 96 pous que conté 200 µL de medi.
  2. Traieu 100 µL de les cèl·lules que contenen A1 i barregeu-les amb B1, pipetant amunt i avall 3 vegades per barrejar bé abans de treure 100 µL i barrejar-les amb C1, etc.

A més, com escolliu una colònia de cèl·lules de mamífers? Col·loqueu la placa sota el microscopi per seleccionar saludables indiferenciats colònies . Trieu colònies utilitzant una pipeta P-20 ajustada a 10 ul. Amb cura recollir a colònia sense trencar el colònia en solter cèl · lules , i transferir-lo a una placa de 96 pous amb tripsina. Pipeteu amunt i avall un parell de vegades per dispersar-lo colònia.

En conseqüència, com s'utilitza un cilindre de clons?

Utilitzant pinces mitjanes estèrils, agafar a cilindre de clonació . Premeu suaument la part inferior plana del cilindre al greix de silicona suau i treure amb un moviment vertical sobtat. Si es fa correctament, això donarà una distribució uniforme del greix a la part inferior cilindre . Estableix el cilindre sobre una colònia.

Com trieu les colònies per a línies cel·lulars estables?

El protocol per generar línies cel·lulars estables requereix diversos passos com es mostra a continuació:

  1. Genereu una corba de mort per determinar la concentració òptima d'antibiòtic de selecció.
  2. Transfectar cèl·lules amb les construccions plasmídiques desitjades
  3. Seleccionar i expandir colònies policlonals estables.
  4. Identificar clons únics per dilució i expansió limitades.

Recomanat: